Expressions of matrix metalloproteinases-1 and -9 and opioid growth factor in rabbit cornea after lamellar keratectomy and treatment with 1% nalbuphine / Metaloproteinases de matriz 1, 9, e fator de crescimento opióide, em córneas de coelhos depois de ceratotomia e tratamento com nalbufina a 1%

ABSTRACT Purposes: To evaluate the effects of nalbuphine 1% on the expression of metalloproteinase 1 (MMP-1), metalloproteinase 9 (MMP-9), and opioid growth factor (OGF) in rabbit corneas after lamellar keratectomy. Methods: The rabbits were assigned to two groups: group nalbuphine (GN, n=30), which received 30 µL of nalbuphine 1% in 4 daily applications at regular intervals until corneal epithelialization, and group control (GC, n=30), which received physiological saline solution under the same conditions adopted in GN. The corneas were collected for immunohistochemistry on days 1, 3, 5, 7, and 9 after lamellar keratectomy, and the expressions of MMP-1, MMP-9, and OGF were analyzed. Results: The expressions of MMP-1 and MMP-9 increased until day 5 of the evaluation, with no differences observed between GN and GC (p>0.05). On days 7 and 9, significant reductions were observed in the expression of MMP-1 (p<0.01), with no differences observed between GN and GC (p>0.05). The expression of OGF was constant in all periods (p>0.05), restricted to the corneal epithelium, and there was no difference between the groups (p>0.05). Conclusions: The study results showed that nalbuphine 1% did not alter the expression patterns of MMP-1, MMP-9, and OGF in rabbit corneas after lamellar keratectomy. .

RESUMO Objetivos: Avaliar os efeitos da nalbufina 1% sobre a expressão da metaloproteinase 1 (MMP-1), da metaloproteinase 9 (MMP-9) e do fator de crescimento opióide (OGF), em córneas de coelhos submetidas à ceratectomia lamelar. Métodos: Constituíram-se dois grupos: grupo nalbufina (GN, n=30), que recebeu 30 µL de nalbufina 1% em 4 aplicações diárias, a intervalos regulares, até a epitelização corneal; controle (GC, n=30), que recebeu solução salina nas mesmas condições adotadas no GN. As córneas foram colhidas para imuno-histoquímica decorridos 1, 3, 5, 7 e 9 dias das ceratectomias lamelares, visando a se avaliarem as MMP-1, MMP-9 e OGF. Resultados: A expressão das MMP-1 e de MMP-9 se elevou até o quinto dia de avaliação, sem diferença entre GN e GC (p>0,05). Nos dias 7 e 9, observou-se redução significativa na expressão das enzimas (p<0,01), sendo que diferenças não foram observadas entre os grupos (p>0,05). O OGF exibiu imunomarcação constante em todos os períodos (p>0,05), restrita ao epitélio corneal. Não foram encontradas diferenças entre os grupos (p>0,05). Conclusões: Com base dos resultados obtidos, há como admitir que a nalbufina 1% não alterou o padrão de expressão da MMP-1, da MMP-9 e do OGF em córneas de coelhos submetidas à ceratectomia lamelar. .

Apoptose na infecção experimental de cães domésticos com Ehrlichia canis / Apoptosis in experimental infection with Ehrlichia canis in domestic dogs

A Erliquiose canina é uma zoonose causada pela Ehrlichia canis, bactéria Gram negativa de distribuição mundial. Alguns cães com erliquiose se tornam portadores assintomáticos enquanto outros desenvolvem uma doença aguda com morte rápida. A apoptose pode ser importante na eliminação de patógenos intracelulares, podendo, nas infecções por Ehrlichia sp. e Anaplasma sp., ocorrer modulação da apoptose celular para prolongar a sobrevivência desses organismos. Para avaliação do papel da apoptose na erliquiose canina, sete cães foram distribuídos em dois grupos. No Grupo inoculado, realizou-se a infecção por via intravenosa com sangue infectado com E. canis (isolado Jaboticabal), sendo realizada a inoculação com PBS estéril nos animais pertencentes ao Grupo Controle. Semanalmente e até 35 dias pós-inoculação, amostras de sangue foram coletadas e submetidas a n-PCR e reação de imunofluorescência (RIFI) para confirmação da infecção. No 36° dia pós-inoculação, os animais foram eutanasiados, sendo as amostras de baço, linfonodo, rim e fígado coletadas e processadas para as técnicas de TUNEL e imunohistoquímica (Bcl-2, Bax). Verificou-se pela n-PCR que os animais inoculados se tornaram positivos para E. canis a partir da segunda semana. Pela RIFI, verificou-se animais com sorologia positiva a partir da terceira semana pós-inoculação. No grupo controle, todos os testes realizados foram negativos para E. canis. Apesar da reação de TUNEL mostrar maior incidência de apoptose no Grupo Inoculado, sendo o baço e os linfonodos os órgãos que apresentaram maior marcação, os resultados da imunohistoquímica para Bcl-2 e Bax indicam que a via intrínseca de apoptose não é importante nos órgãos analisados.

Some dogs infected with Ehrlichia canis become asymptomatic while others develop an acute illness followed by quick death. Apoptosis may be an important mechanism for elimination of intracellular pathogens. Also, Ehrlichia sp. and Anaplasma sp. can modulate apoptosis to extend their survival. To evaluate the role of apoptosis in canine ehrlichiosis, 7 dogs were assigned into 2 groups, one with 4 animals inoculated intravenously with blood infected with Ehrlichia canis (Jaboticabal isolate) and a control with 3 dogs, inoculated with sterile PBS. Blood samples were collected weekly and 35 days post-inoculation to confirm the infection by nPCR and immunofluorescence. Thirty-six days after inoculation the animals were euthanized and samples from spleen, lymph nodes, kidney and liver were collected to carry out the TUNEL technique and immunohistochemistry (Bcl-2, Bax). Inoculated animals became positive for E. canis by nPCR already in the second week and by immunofluorescence in the third week after inoculation. The control group showed negative for E. canis in all tests. The TUNEL reaction showed a higher incidence of apoptosis in the inoculated group, with stronger labeling in the spleen and lymph nodes. The results of immunohistochemistry for Bcl-2 and Bax suggest that the intrinsic pathway of apoptosis is not important in the analyzed organs.

Topical 1% Nalbuphine on corneal sensivity and epitheilization after experimental lamellar keratectomy in rabbits / Nalbufina 1% tópica sobre a sensibilidade e a epitelização corneal após ceratectomia lamelar experimental

The present study was aimed to evaluate the effects of topical 1% nalbuphine on corneal sensitivity and re-epithelialization, after lamellar keratectomy in rabbits. All protocols were approved by the Animal Care Comission of São Paulo State University (Protocol 028793-08) and were conducted in accordance with the Institutional Animal Committee and the Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) statement for the use of animals in research. Surgeries were performed on the left eye (Nalbuphine Group) and on the right eye (Control Group). Two groups were formed (n=10) and corneas received either 30µl of 1% nalbuphine (NG) or 30µl of 0,9% saline (CG). Treatments occurred at 7, 11, 15 and 19 hours. After the surgery, the corneas were stained with fluorescein and photographed daily; corneal touch threshold (CTT) was assessed with Cochet-Bonnet aesthesiometer, at 7 and 19 hours, 20 minutes after treatments. Data were statistically compared with repeated measures ANOVA and Bonferroni post-hoc test, and T test (P<0.05). Average ±SD time for corneal re-epithelialization was 7.40±0.47 days (NG) and 8.90±0.31 days (CG) (P=0.11). The results showed that the diameter of the keratectomized area and CTT did not change significantly between both groups (P>0.05); however, a higher area under the curve for both parameters was observed in the NG (2771), in comparison to CG (2164). Topical 1% nalbuphine did not change significantly corneal sensitivity and re-epithelialization, after experimental lamellar keratectomy in rabbits.

Avaliaram-se os efeitos da nalbufina 1% sobre o limiar de sensibilidade corneal (LSC) e a epitelização corneal em coelhos submetidos à ceratectomia lamelar unilateral. Os procedimentos foram aprovados pela Comissão de Ética no Uso de Animais da Faculdade de Ciências Agrarias e Veterinárias da Universidade Estadual Paulista (Protocolo no 028793-08), de acordo com as normas do Institutional Animal Committee and the Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO). Conceberam-se dois grupos (n=10) e os olhos foram tratados com 30µl de Nalbufina 1% (Olho esquerdo - GN) ou com 30µl de solução salina (Olho direito - GC), às 7, 11, 15 e 19 horas das ceratectomias unilaterais, até sua reepitelização. O limiar de sensibilidade corneal (LSC) foi avaliado 20 minutos após cada tratamento, 48 horas antes e depois da ceratectomia a intervalos regulares de 12 horas (7 e 19 horas) com estesiômetro de Cochet-Bonnet. Após a realização da cirurgia, diariamente, as córneas foram coradas com fluoresceína e registradas em fotos digitais para mensuração em software Image-J. A normalidade dos dados foi avaliada ao teste de Kolmogorov-Smirnov. O limiar de sensibilidade e a área ulcerada foram comparados ao teste de Bonferroni, após ANOVA de medias repetidas (P<0,05). O teste t-Student foi aplicado na avaliação das médias quanto ao tempo de reepitelização. Não houve diferença significativa quanto ao limiar de sensibilidade entre os grupos, em qualquer dos períodos avaliados (P>0,05), todavia, constatou-se maior área sob a curva, relativamente ao LSC, no GN (2771), comparativamente ao GC (2164). O tempo médio±DP de reepitelização no GN foi de 7,40±0,47 dias e de 8,90±0,31 dias no GC, não havendo diferença significativa entre os grupos (P=0,11). Como conclusão, tem-se que o uso tópico de nalbufina 1% não alterou significativamente o limiar de sensibilidade e a reepitelização corneais em coelhos submetidos a ceratectomia lamelar experimental.

Ovário-histerectomia vídeo-assistida com único portal em cadelas: estudo retrospectivo de 20 casos / Single-port video-assisted ovariohysterectomy in bitches: retrospective study of 20 cases

O objetivo do presente estudo foi avaliar retrospectivamente as 20 primeiras ovário-histerectomias vídeo-assistidas com único portal (SPVA-OSH), realizadas por um cirurgião não proficiente nessa técnica. Vinte cadelas foram submetidas à laparoscopia para SPVA-OSH, com o auxílio de um endoscópio de 10mm, com canal de trabalho de 5mm, inserido por um trocarte, posicionado na região pré-púbica, e coagulação bipolar. O tempo cirúrgico médio foi de 22,95±5,17 minutos. Os cinco primeiros procedimentos consumiram mais tempo cirúrgico do que os demais. A abordagem aos pedículos ovarianos direito e esquerdo foram as etapas que apresentaram maior tempo de execução. Houve complicação leve ou moderada em seis (30 por cento) das 20 cadelas operadas. As complicações foram: hemorragia leve ou moderada em um dos pedículos ovarianos em quatro (20 por cento) cadelas e hemorragia grave, devido à punção do baço com agulha de Veress em dois (10 por cento) animais. A SPVA-OSH foi realizada em cadelas por um cirurgião no início da curva de aprendizado, sem complicações maiores.

The aim of the present study was to evaluate retrospectively the first 20 cases of single-port video-assisted ovariohysterectomy (SPVA-OSH) performed by an inexperienced surgeon. Twenty bitches submitted to SPVA-OSH were assessed. A 10mm operative rigid endoscope with one 5 mm working channel and bipolar coagulation was used. The trocar was positioned in the prepubic area of the abdomen. Surgical time and complication rates were assessed descriptively. Mean surgical time was of 22.95±5.17 minutes. Mild or moderate complications were present in six (30 percent) out of 20 bitches that were operated. The first five surgical procedures spent more time to be performed than the others. The longest transoperative momentum time of execution was spent in the approach to the left and right ovarian pedicles. The complications were: mild or moderate hemorrhage from one of the ovarian pedicles in four bitches (20 percent) and severe hemorrhage due to accidental puncture of the spleen with Veress needle in two animals (10 percent). SPVA-OSH was performed in bitches by an inexperienced surgeon, without severe complications.

Intraocular pressure and tear secretion in Saanen goats with different ages / Pressão intraocular e produção lacrimal em cabras da raça Saanen com diferentes idades

This study aimed to compare the normal intraocular pressure (IOP) and tear secretion, by means of applanation tonometry and the Schirmer tear test-1 (STT-1), in goats of the Saanen breed with different ages, and at different time points. Thirty six goats, free of ocular abnormalities, were grouped into three different age categories (n=12), animals with 45, 180 and 549 days of age. STT-1 and IOP measurements were carried out always at 9:00am and 7:00pm, during three consecutive days. Results were evaluated statistically (P<0.05). Regarding the time of the day, overall IOP values were significantly lower at 7:00 pm (P<0.001) in individuals with 45 days of age; whereas STT-1 values were significantly higher at 7:00pm (P=0.004) in goats with 549 days of age. Considering the sum of three days, both parameters were significantly lower in individuals with 45 days of age (P<0.001). Intraocular pressure and tear secretion values increase until 180 days of age in the Saanen breed of goats.

Objetivou-se comparar os valores normais de pressão intraocular (PIO) e de produção lacrimal, através de tonometria de aplanação e do teste da lágrima de Schirmer-1 (TLS-1) em cabras da raça Saanen, com diferentes idades e momentos. Trinta e seis cabras da raça Saanen, livres de afecções oculares, foram agrupadas em três categorias etárias (n=12), compreendendo animais com 45, 180 e 549 dias de idade. O TLS-1 e a PIO foram aferidos sempre às 9:00 e às 19:00, durante três dias consecutivos. Os resultados foram avaliados estatisticamente (p<0,05). Relativamente ao horário do dia, a PIO foi significativamente menor às 19:00 (p<0,001) nos animais com 45 dias de idade; os valores do TLS-1 foram significativamente maiores às 19:00 (p=0,004) nas cabras com 549 dias de idade. Considerando-se a somatória dos três dias, ambos os parâmetros foram significativamente menores nos indivíduos com 45 dias de idade (p<0,001). A pressão intraocular e a produção lacrimal em cabras da raça Saanen se elevam de forma significativa até os 180 dias de idade.